“這里是與病毒‘零距離’接觸的地方，整個(gè)實(shí)驗室完全密封，室內處于負壓狀態(tài)，我們喜歡用‘三流’來(lái)形容它，即人流、物流、氣流的單向流動(dòng)，確保在里面的污染物不會(huì )泄漏到外面而造成污染?！睆V東省第二人民醫院P3實(shí)驗室主任林劍國說(shuō)，“這里”指的就是P3實(shí)驗室。廣東省第二人民醫院每天400多份新冠肺炎核酸檢測就是在這里開(kāi)展的。

現在，我們一起來(lái)揭開(kāi)廣東省第二人民醫院P3實(shí)驗室的神秘面紗，看看病毒究竟在P3實(shí)驗室是怎樣被“揪出來(lái)”的？

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揭秘一：前世今生

P3實(shí)驗室是生物安全防護三級實(shí)驗室，P是Protection的縮寫(xiě)。整個(gè)實(shí)驗室完全密封，室內處于負壓狀態(tài)，從而使實(shí)驗室內部的氣體不會(huì )泄漏到外面而造成污染，也就是“氣流”的單向流動(dòng)。實(shí)驗室生物安全防護實(shí)驗室是指實(shí)驗室的結構和設施、安全操作規程、安全設備能夠確保工作人員在處理含有致病微生物及其毒素時(shí)，不受實(shí)驗對象侵染，周?chē)h(huán)境不受污染。

根據微生物及其毒素的危害程度不同，分為四級，一級最低，四級最高。廣東省第二人民醫院新冠病毒核酸檢測就是在P3實(shí)驗室進(jìn)行的。

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揭秘二：抽絲剝繭

核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”，而檢測流程中的每一個(gè)環(huán)節都是精細活，容不得半點(diǎn)馬虎。在操作中，實(shí)驗員面對眼前的樣本，需要“一個(gè)一個(gè)地揭開(kāi)蓋子，開(kāi)蓋加樣和核酸提取”，這無(wú)疑是與“病毒”正面交鋒，現在來(lái)看省二醫的實(shí)驗員是如何一一過(guò)招。

實(shí)驗室內的檢測流程可分為5個(gè)步驟：樣本進(jìn)入“傳遞窗”——滅活處理——開(kāi)蓋加樣和核心提取——擴增反應判斷結果——高壓滅菌。

第一步，樣本進(jìn)入實(shí)驗室也有講究——“傳遞窗”隔離空氣。
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“傳遞窗”也叫Air Lock（空氣鎖）

采集的檢測樣本如咽拭子或肛拭子，在進(jìn)入P3實(shí)驗室前就得先進(jìn)入一個(gè)特殊的窗口——“傳遞窗”，這個(gè)窗口也叫Air Lock，空氣鎖。顧名思義，與空氣有關(guān)，這個(gè)傳遞窗有不能同時(shí)打開(kāi)的雙重門(mén)，保證傳遞樣本時(shí)帶進(jìn)去的空氣被隔離在雙重門(mén)中，保證實(shí)驗室外的環(huán)境不受污染。這也是“三流”中“物流”，樣本的命運起點(diǎn)，在這里開(kāi)啟它在實(shí)驗室中短暫的一生。
第二步，檢測前的滅活處理——不一定但相對的安全。
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標本處理間，在這里進(jìn)行開(kāi)蓋加樣和核酸提取。

樣本在水浴箱經(jīng)半個(gè)小時(shí)56℃高溫滅活，這樣會(huì )使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，在對樣本進(jìn)行檢測時(shí)相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒(méi)有受到影響。

第三步，檢測的核心環(huán)節——進(jìn)行開(kāi)蓋加樣和核酸提取。
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通過(guò)核酸擴增儀進(jìn)行擴增反應。

第四步，擴增反應——45個(gè)循環(huán)繪制熒光曲線(xiàn)判斷結果。
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根據曲線(xiàn)和參數分析判斷結果。

提取的核酸送到核酸檢測室內，就要上儀器了。提取的核酸加入擴增試劑中，通過(guò)熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應，先將提取的核酸逆轉錄成DNA，再以DNA為模版，對特定位點(diǎn)進(jìn)行擴增，利用不同的溫度進(jìn)行變性、退火和延伸，每個(gè)循環(huán)采集熒光值，45個(gè)循環(huán)后繪制熒光曲線(xiàn)，用時(shí)約110分鐘，實(shí)驗員根據熒光曲線(xiàn)分析判斷結果的陰性和陽(yáng)性。

第五步，污染物的高壓滅菌處理。

實(shí)驗過(guò)程產(chǎn)生的污物通過(guò)高壓滅菌后，按相關(guān)普通醫療垃圾處理?！拔锪鳌钡慕K點(diǎn)在這里就結束了。
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產(chǎn)生的污物通過(guò)高壓滅菌后，按相關(guān)醫療垃圾處理

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揭秘三：傾柯衛足

“三流”中的“人流”又是什么？來(lái)看看工作人員是如何工作的。

首先在清潔區內穿戴中級防護服——通過(guò)緩沖間進(jìn)入到實(shí)驗室內負壓工作間，在這里進(jìn)行標本處理，核酸提取及檢測——完畢后進(jìn)行空間、表面消毒，按順序脫下防護服——通過(guò)淋浴間更衣后，回到清潔區。這些步驟一個(gè)都不能少！
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通過(guò)緩沖間進(jìn)入到實(shí)驗室內。

核酸檢測的主要宗旨是高效、有序和安全。其中安全是重中之重，尤其是工作人員的安全。到目前為止，P3實(shí)驗室未出現過(guò)生物安全問(wèn)題，當然也與平時(shí)訓練有關(guān)。

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揭秘四：棄偽存真

任何一個(gè)環(huán)節都不能忽視，任何一個(gè)環(huán)節出現問(wèn)題都可能導致“假陰性”或“假陽(yáng)性”。因此，為保障檢測的質(zhì)量，檢測結果將經(jīng)歷重重的比對與復核。

據介紹，檢測質(zhì)量的保障措施在檢測前就已經(jīng)開(kāi)始了，樣本采集的醫務(wù)人員必須經(jīng)過(guò)嚴格的培訓和考核才能上崗，樣本的質(zhì)量與采集的技術(shù)密切相關(guān)，每一幀動(dòng)作流程都必須按規定進(jìn)行，樣本采集完后的護送工作都需按照嚴密的程序，由專(zhuān)人專(zhuān)道配送到實(shí)驗室。

在檢測過(guò)程中，實(shí)驗員保持始終如一的謹慎態(tài)度進(jìn)行每一次測試，不錯過(guò)任何一個(gè)可疑樣本，針對可疑樣本，選用不同的試劑進(jìn)行復核確定，以防止“假陰性”的出現；其次，每進(jìn)行一批實(shí)驗，均會(huì )隨機插入三個(gè)以上空白對照，針對陽(yáng)性樣本會(huì )進(jìn)行病毒基因的測序比對，以防止“假陽(yáng)性”的出現。

檢測后，定期隨機抽取檢測后的樣本送第三方實(shí)驗室進(jìn)行檢測，對數據進(jìn)行對比分析，同時(shí)也參加衛生主管部門(mén)和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評，保障檢測的準確性。

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揭秘五：所向披靡

P3檢測團隊目前有21人，實(shí)行一天三班制。在疫情非常時(shí)期，為了滿(mǎn)足檢測需求，縮短檢測時(shí)間，在原有團隊基礎上，從風(fēng)濕免疫科、血液科等科室實(shí)驗室調配增加人員。“偵察兵”的檢測團隊70%以上是碩士以上學(xué)歷，均經(jīng)過(guò)分子生物學(xué)的培訓和擁有PCR上崗證。
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譽(yù)為“偵察兵”的檢測團隊。

P3實(shí)驗室主任林劍國，2002年獲得華中科技大學(xué)傳染病學(xué)專(zhuān)業(yè)醫學(xué)博士，分別在美國疾控中心、Emory大學(xué)、Saint Louis 大學(xué)從事病毒發(fā)病機制及疫苗研制等方面工作達14年，在高致病性病毒的處理及生物安全方面積累了豐富的經(jīng)驗。

實(shí)驗室嚴格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測人員需在P3實(shí)驗室負壓密閉的空間里穿著(zhù)三級防護裝備，5個(gè)小時(shí)不吃不喝，甚至穿戴成人紙尿褲以解決上廁所的需要，隨時(shí)需要面對和克服因負壓差及嚴密裝備導致出現的頭暈、嘔吐等癥狀。

“他們與戰斗在病房里的醫護人員不同，他們藏在實(shí)驗室里，每天與病毒近距離接觸，是別人看不見(jiàn)的‘最前線(xiàn)’。”廣東省第二人民醫院P3主任林劍國說(shuō)。

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?文中圖片均由作者提供

科技日報記者 龍躍梅?

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